在《2024财年GDUFA科学与研究报告》中，FDA利用内部资源和外部合作，在九大领域开展了超过70项研究课题，涵盖当前仿制药研发、审评以及监管科学的重大课题，旨在全面促进仿制药产品开发和可及。

如今的仿制药开发已不同以往，在质量和成本的双重压力下，我国仿制药企业有必要迎头赶上，走在技术的最前沿，同时也要立足中美市场并走向全球。FDA的研究能够提供与一般指南不一样的独特角度，不仅提示开发方向，也可解决实际问题。

识林将逐一编译报告内容，包括代表性课题内容、课题目录以及已发表文献清单，陆续发布，供我国仿制药企业查阅参考。

第二章：复杂API

在GDUFA III期间，一个主要的GDUFA科学和研究优先领域是针对复杂原料药（API）等效性评估，例如肽类和寡核苷酸类。该领域的研究重点在于改进用于表征复杂API及其相关杂质谱的化学组成、分子结构和分布以及相关杂质谱的先进正交方法。这些方法可用于阐明复杂API的属性，并支持至关重要的免疫原性风险评估，从而促进开发基于高效表征的生物等效性（BE）和药学等效性（PE）方法。下文描述了2024财年与这一优先领域相关的研究工作。

孤儿药硫酸戊聚糖钠（PPS）：定量核磁方法

硫酸戊聚糖钠（PPS）是一种源自山毛榉树的半合成聚硫酸木聚糖。PPS主要由硫酸木糖链组成，并带有支链O-甲基葡萄糖醛酸（MGA）。通过定量核磁共振（qNMR）进行的批间差异分析显示，与工艺相关的醛和吡啶的化学修饰比MGA或乙酰化的化学修饰表现出更大的变异性，这表明植物来源原料的一致性良好，但工艺引入的化学加合物存在显著差异。该研究表明，qNMR是测量药品批次间细微化学差异的灵敏工具，且NMR方法固有变异小于批次间的变异性。

醋酸格拉替雷：新的表征方法

TEVA曾经的“重磅炸弹”醋酸格拉替雷（Glatiramer Acetate）是一种平均分子量为5-9 kDa的肽类共聚物。微芯片毛细管区带电泳-质谱联用（CZE-MS）的新应用根据肽的电泳迁移率进行分离，提供了一种正交分离方法来补充传统的液质联用方法（LC-MS）。CZE-MS方法被用于分析酶解后的醋酸格拉替雷，并进行靶向分析。结果表明，CZE-MS可以作为分析消化酶解后醋酸格拉替雷的互补性表征手段。

宿主细胞蛋白（HCP）杂质：新的液质联用方法

对于重组表达的肽类药物，宿主细胞蛋白（HCP）杂质的存在与免疫原性风险密切相关。FDA实验室开发并验证了一种无偏倚的LC-MS/MS方法，用于鉴定和定量比较特立帕肽中的HCP，检测已批准的重组特立帕肽HCP谱的批间变异性，该结果现在可以作为后续新产品以及同一产品在工艺变更前后的参考。

寡核苷酸治疗药物（ONTs）及杂质：高分辨质谱方法

为提高合成寡核苷酸治疗药物（ONTs）的药物稳定性、疗效和/或安全性而引入的化学修饰导致分子更加复杂，给新型和仿制ONTs带来了分析和监管挑战。高分辨率质谱（HRMS）展现出增强的分析能力，能够解析ONTs的复杂性，并对其杂质进行深入评估。

一个例子是利用HRMS实现的同位素峰分布来解析传统LC-MS分析无法分辨的共洗脱同量异位杂质。FDA继续与外部合作者合作开发分析方法以研究寡核苷酸药物，其中包括支持马里兰大学巴尔的摩分校关于硫代磷酸寡核苷酸inotersen（U01FD007651）的非对映异构体组成分析，以及分析siRNA药物inclisiran（英克司兰钠，U01FD008322）中每个非对映异构体对整体生物活性的贡献。

研究亮点：复杂肽类药品免疫原性风险检测方法

2023年11月16日，FDA批准了首个特立帕肽仿制药，用于数百万骨质疏松症患者。该药物具有潜在免疫原性风险，因此FDA要求仿制药企论证其产品免疫原性风险不高于参比制剂（RLD）。为此，药企需要进行杂质可比性研究，并通过计算机模拟（in silico）和/或体外分析来评估并解决这些差异。GDUFA确立了一个研究优先事项，以提高用于复杂API（如肽类）的等效性方法的效率。多年来由此产生的内部和外部研究合作系统地推进了科学认知，并改进了用于评估复杂肽类药品免疫原性风险的检测方法。

得益于仪器技术的进步，FDA开始收到使用LC-HRMS方法定量肽类杂质的肽类仿制药申请。与基于LC-UV的检测方法相比，HRMS的灵敏度和特异性颇具优势，尤其是针对肽类和蛋白质类药物的复杂杂质谱。

为了更高效审评此类前沿方法数据，FDA内部研究开发并验证了一种基于LC-HRMS的方法，用于定量特立帕肽中的六种肽类相关杂质。特立帕肽（RLD是礼来的FORTEO）是一种34个氨基酸的多肽。研究人员使用每种肽的杂质标准构建了外部校准曲线（图 1）。该方法显示出良好的特异性、灵敏度、线性、准确度、重复性、中间精密度和耐用性。每种肽的定量下限（LLOQ）约为0.08-0.14 ng（相当于0.02%或0.03%的特立帕肽，柱载量为0.5 μg，低于0.10%的监管报告阈值）。研究发现，使用每种肽的三个同位素峰进行定量，相比使用一个同位素峰，并未带来显著优势。该方法没有采用昂贵且不切实际的方式加入每种杂质的稳定同位素标记内标，仍然成功通过了验证。与基于LC-UV的检测方法不同，鉴于HRMS仪器的复杂性和潜在的日常变异性，每日验证定量准确性非常重要。因此，日常系统适用性检查中，需要对方法范围内选定的数据点进行有限的验证。在某些情况下，发现使用每日再生最小（2或3点）校准曲线的替代方法是可行的。